Laktoferrin saflaştırılması için antikor çapraz bağlı kriyojel kolon

Abstract

Laktoferrin (Lf), sütte bulunan ve önemli biyolojik aktivitelere sahip bir glikoproteindir. Yapılan tez çalışması ile vücut salgılarında bulunan, demir içeren bir savunma proteini olan ve tümör büyümesini de engelleyen Lf’nin inek sütünden saflaştırılması için anti-laktoferrin (anti-Lf) antikoru çapraz bağlı yeni nesil kriyojel kolon geliştirilmesi ve afinite kromatografi amaçlı kullanılması hedeflenmiştir. Bu amaçla; gözeneklerine anti-Lf tutturulmuş çapraz bağlı kriyojel kolon sentezlenmiştir. P(Anti-Lf-co-HEMA) kriyojeli kolon dolgu maddesi olarak kullanılmış ve Lf’nin Hızlı Protein Sıvı Kromatografisi (FPLC) ile ayırımı sağlanmıştır. İnek sütünden elde edilen Lf’nin saflığı SDS PAGE ile araştırılmıştır. Geliştirilen kolonun karakterizasyonu şişme testi, FT-IR, SEM ve BET analizleri ile yapılmıştır. Sonuç olarak; R. SAY tarafından WIPO ve USPTO patenti alınan fotoduyarlı konjugasyon yöntemi (ANADOLUCA) kullanılarak Lf ’yi yüksek seçicilikte ayırabilen ve tekrar kullanılabilen bu kolonlar ilk kez geliştirilmiştir. Geliştirilen bu kolonlar, kanser, aşı ve görüntüleme teknolojileri için önemli bir ajan olan Lf’nin saflaştırılması için bir alternatif oluşturacaktır.Lactoferrin (Lf) is a glycoprotein which is found in milk and has significant biological activities. In this thesis, improving of a new generation cross linked anti-lactoferrin (anti-Lf) antibody cryogel column and using it in affinity chromatography have intended for the purification of Lf which is found in body fluids, a defense protein containing iron and inhibits growth of tumor from cow milk. For this purpose, cross-linked cryogel column which contains anti-Lf in its pores has synthesized. P(Anti-Lf-co-HEMA) cryogel has used as column filling (extender) material and Lf separation has provided by Fast Protein Liquid Chromatography (FPLC). The purity of Lf obtained from cow milk has investigated by SDS-PAGE. The swelling test, FT-IR, SEM and BET analyses have applied for the characterization of the column. As a result; the columns which have high selectivity for Lf and are reusable have improved for the first time using photosensitive conjugation method (ANADOLUCA) which has WIPO and USPTO patented by R. Say. These developed columns will be an alternative for the purification of Lf which is an important agent for cancer, vaccine and imaging technologies.