Prostat Kanseri Hücrelerinde miR-375 ve miR-25b-5p'nin Hedef Genlerinin ve PI3K Sinyal Yoluna Etkisinin Belirlenmesi

Abstract

Prostat kanseri, dünya çapında erkekler arasında en sık teşhis edilen ikinci kanser ve kanser ölümlerinin önde gelen beşinci nedenidir. Dünya ülkelerinin yarısından fazlasında (112/185) erkeklerde en sık teşhis edilen kanserdir. Prostat kanseri bu kadar yaygın olmasına rağmen, etyolojisi hakkında nispeten çok az şey bilinmektedir. Risk faktörleri, ilerleyen yaş, malignitenin aile öyküsü, belli genetik mutasyonlar (BRCA1 ve BRCA2 gibi) ve hastalıklar (Lynch sendromu) ile sınırlıdır. Prostat kanserinde miRNA?ların önemli bir rolünün olduğu bilinse de bu alanda literatürde eksiklik bulunmaktadır. Yapılacak çalışma ile prostat kanseri hücrelerinde miR-375 ve miR-125b-5p?nin ve hedeflerinin hem de bu miRNA?lar veya etkili olduğu düşünülen genlerin PI3K sinyal yolağı üzerindeki etkilerinin incelenmesi amaçlanmıştır. Yapılması planlanan projede miR-375 ve miR-125b-5p?nin mimic/inhibitörleri kullanılarak transfeksiyon işlemleri gerçekleştirilmiştir. Devamında ise miRNA ve mRNA ekspresyon seviyelerinin belirlenmesi amacıyla hücrelerden miRNA ve RNA izolasyonları gerçekleştirilmiş ve örneklere cDNA dönüşümü uygulanmıştır. Elde edilen cDNA örneklerine qPCR işlemi uygulanmış ve ekspresyon seviyeleri incelenmiştir. Aynı zamanda biyoinformatik analizlerle tespit edilen TSC1 ve CYTH1 geninin ilgili miRNA?larla ilişkili olup olmadığının araştırılması amacıyla genlerin 3?-UTR bölgelerini içeren plazmit dizaynı yapılmış ve transfeksiyon sonrası lusiferaz aktiviteleri ölçülüp analizler sonrasında sonuçlar değerlendirilmiştir. Sonuçlar incelendiğinde ise miR-375?in TSC1 i hedeflemediği, miR-125b-5p?nin ise CYTH1 anlamlı bir değişiklik olmamasına karşılık çıkan sonuçlar hedefi olabileceğini düşündürmektedir. Gen ekspresyon analizlerine bakıldığında ise miR-375 ve miR-125b-5p?nin sinyal yolundaki molekülleri etkilediği gösterilmiştir. Fakat hücrelerdeki etkileri farklılık göstermektedir. PI3K sinyal yolundaki moleküllerin o yolaktaki farklı genler tarafından da düzenlenmesi, hücrelerin karakteristik özelliklerinin farklı olması ve hatta aynı genler üzerinde farklı miRNA?ların da etki ettiği için bu farklılıkların meydana geldiği ortaya çıkmaktadır. Sonuç olarak, çalışma sonucunda elde edilen veriler kanser gelişiminde önemli bir yere sahip olan PI3K sinyal yolağının prostat kanseri oluşundaki etkilerinin anlaşılması açısından önemlidir ve literatüre katkı sağlayacaktır. miRNA?ların biyobelirteç olarak kullanımı veya yeni tedavi seçeneklerinin geliştirilebilmesi açısından önemli bir çalışmadır.